Técnicas de hibridación - Diabetes mellitus 2

HIBRIDACIÓN MOLECULAR

La hibridación molecular es importante porque mediante técnicas se ha diseñado para identificar determinadas secuencias en los ácidos nucleicos.

Los métodos de hibridación se basan en el proceso de renaturalización de dos cadenas sencillas de ácido nucleico, muestra o diana, con una sonda marcada de secuencia conocida, que bajo condiciones experimentales permiten el apareamiento entre bases complementarias. El método de detección de los híbridos formados depende del marcaje empleado en la sonda. [1]

Técnica de Southern Blot

 El ensayo Southern Blot  es eficaz porque permite descubrir secuencias génicas específicas y mutaciones responsables de enfermedades genéticas, así como de ciertos agentes infecciosos. La ejecución de este ensayo implica seccionar el ADN en fragmentos que contengan la secuencia o la mutación de interés, para lo cual se utilizan enzimas de restricción. Mediante electroforesis en un gel de agarosa, los fragmentos se separan por tamaño y se transfieren a una membrana de nylon o de nitrocelulosa, con la finalidad de obtener una réplica del gel. Luego, la membrana se incuba con el gen clonado o con una sonda oligonucleótido complementaria, de manera que se produce la hibridación de los fragmentos de ADN que contienen la secuencia genómica analizada. [2]

Bibliografía

1. Adams Villalón Y, Bencomo Hernández A, Rodríguez Leyva R, Aquino Rojas S, González Díaz I. La biología molecular en el estudio de la inmunopatología [Internet]. Scielo.sld.cu. 2014 [cited 28 May 2017]. Available from: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892014000400003

2. Villegas V, Sánchez M, Chuaire L. Reacción en cadena de la polimerasa y diagnóstico molecular [Internet]. Colombia médica. 2010 [cited 28 May 2017]. Available from: http://bibliotecadigital.univalle.edu.co/bitstream/10893/3325/1/polymerase.pdf

Prueba de PCR para Diabetes Mellitus tipo 2

1. Tema: Efectos de nuevos polimorfismos en el gen RAGE sobre la regulación transcripcional y su asociación a retinopatía diabética"

2. Objetivo: Identificar mediante técnicas moleculares los polimorfismos asociados al gen RAGE y su interacción con la retinopatía diabética y en la patogénesis de complicaciones vasculares diabéticas.

3. Muestra: Sangre en ayuno.      Kit de extracción: Nucleon Biosciences

4. Tipo de muestra: DNA genómico leucocitario

5.  Extracción: 
  
   - Lisis: Shock térmico
   -Separación: Fenol cloroformo
   -Purificación: Etanol

6. Gen: gen RAGE U89336

7. Tamaño en pares de bases: 190-230 pdb

8. Tipo de PCR: PCR-RFLP

9. Visualización: Electroforesis (EFO)
10. Pasos:

  -Desnaturalización: 94°C por 60 segundos
  -Hibridación: 56°C por 60 segundos             x 30 ciclos
  -Elongación: 72°C por 60 segundos


Bibliografía

1. Yang L, Qunhong W, Yuan L. Association of the Receptor for Advanced Glycation End Products Gene Polymorphisms and Circulating RAGE Levels with Diabetic Retinopathy in the Chinese Population [Internet]. China: Maegdefessel Lars; 2013 [cited 21 May 2017]. Available from: https://www.hindawi.com/journals/jdr/2013/264579/abs/

Prueba de Tamizaje y Confirmatoria para Diabetes Mellitus 2

                                                       
                                  Prueba de Tamizaje - Screening

INSTRUMENTO PARA EL TAMIZAJE DE DMT2

Se ha usado un instrumento para el tamizaje de diabetes tipo 2 (ITD), mismo que permite determinar la asociación entre un diagnóstico nuevo de diabetes (variable dependiente) y 11 factores de riesgo conocidos (variables independientes): sexo, edad, antecedentes familiares de diabetes, hipertensión y obesidad, sedentarismo, IMC, trigleridemia, glucemia en ayunas entre otros. Mediante estos ámbitos se calcular el valor del coeficiente beta que expresa la asociación entre la variable independiente y la presencia de diabetes [1].

EXAMEN DE GLUCOSA EN AYUNAS (BASAL)

2. Valores en glucosa en ayunas y posprandial que indican DMT2.

En cuanto a la glucemia en ayunas,  las cifras han ido descendiendo fuera del embarazo, desde 7,8 mmol/L, luego 7,0 mmol/L, y al aparecer el término de glucemia en ayunas alterada (GAA) hasta 6,1 mmol/L (110 mg/dL). Más recientemente, la American Diabetes Association (ADA), ha llevado esta cifra inferior a 5,6 mmol/L (100 mg/dL). Aunque se mantiene el criterio de la sobrecarga de 75 g de dextrosa y el valor de la glucemia a las 2 h según los criterios de la OMS, se ha aceptado el valor propugnado por la ADA en ayunas [2].

Prueba Confirmatoria

HEMOGLOBLINA GLICOSILADA (HbA1c)

3. Valores de HbA1c  en el diagnóstico de DMT2.

Se usa la Hb1Ac para el diagnóstico de la diabetes mellitus tipo 2,  y para el seguimiento de la misma. El punto de corte para diagnóstico de diabetes mellitus se estableció por los autores en 6.5% basándose en el punto de inflexión desde el cual comienza a aumentar la incidencia de retinopatía diabética. El rango de A1c para definir un “riesgo aumentado de diabetes” fue establecido en 5.7 a 6.4%. Los laboratorios que miden A1c mencionan como rango de referencia de 4.0 a 6.0%. La presente sugerencia de la ADA hará que en el futuro los laboratorios modifiquen su rango de referencia a 4.0 a 5.6%. [3]

Bibliografía 

1. Guerrero-Romero F, Rodríguez-Morán M. Validación de un instrumento para el tamizaje de casos de diabetes tipo 2 y la vigilancia de personas en riesgo en México [Internet]. Scielo. Public Health. 2010 [cited 14 May 2017]. Available from: http://www.scielosp.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1020-49892010000300005

2.Márquez Guillén A, Lang Prieto J, Valdés Amador L, Cruz Hernández J, Guerrero Rodríguez E. Prediabetes y diabetes gestacional [Internet]. Scielo.sld.cu. 2011 [cited 14 May 2017]. Available from: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-29532011000100011

 3. Juan Fernando Z. Diagnóstico de diabetes con hemoglobina glicosilada [Internet]. 1st ed. México; 2010 [cited 14 May 2017]. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/evidencia/eo-2010/eo101f.pdf

Alteraciones Epigenómicas

1. Etapas del desarrollo en el que se presentan alteraciones epigenéticas

La obesidad y la diabetes mellitus tipo 2, principalmente han sido consecuencia del sedentarismo, dietas altas en carbohidratos y la predisposición genética.  La metilación del ADN es un mecanismo importante en la regulación de la transcripción y expresión de varios genes por lo tanto su disminución en el aporte de donadores de grupos metilo durante el embarazo, como folatos, metionina y colina (junto con el complejo B), se ha asociado a una disminución de la metilación del ADN en el recién nacido. Los niveles altos de glucosa e insulina durante el embarazo influyen en el riesgo de desarrollo de Diabetes Mellitus 2, lo que indica que los patrones de expresión a través de la memoria celular en los tejidos específicos se modifican.

Bibliografía

1. Valladares A, Suárez F. Epigenética de la obesidad infantil y la Diabetes Mellitus 2 [Internet]. 1st ed. México; 2013 [cited 07 May 2017]. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2014/ims141o.pdf